Optimisation de purification de protéine par chromatographie (FPLC)
La purification de protéines en fusion avec un tag d'affinité ne fonctionne pas, ou vous avez besoin d'une protéine native.
Exemple de purification de protéine d'intérêt par différentes méthodes de chromatographie.
Par défaut, la protéine d'intérêt est couplée avec une queue 6 histidines (HIS-TAG) soit en N-terminal, soit en C-terminal afin de permettre une purification facile par affinité (IMAC).
Pour différentes raisons, d'autres méthodes de purification peuvent être privilégiées, par exemple le besoin d'avoir une protéine dans sa configuration la plus native possible, le masquage du tag lors du repliement de la protéine, un clivage de la partie N-ter lors des processus de maturation, etc....
Dans le cas de cette protéine (ci-dessous), la queue 6-His était partiellement accessible, affectant ainsi son affinité pour la colonne, des méthodes alternatives ont dû être élaborées. L'objectif était d'avoir une protéine ultrapure pour des essais de vaccinologie.
N'hésitez pas à nous faire part de vos besoins spécifiques.
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