Optimisation & tests d'expression
Evalution et mise au point du protocole optimal
Test d'expression (BEVS)
Afin de déterminer si la protéine d'intérêt est exprimée à des niveaux convenables et de monitorer les problèmes éventuels. Un test d'expression est réalisé sur des cellules.
Ensuite, nous ferons plusieurs cinétiques en modifiant alternativement plusieurs paramètres pouvant :
- Le temps de post-infection 48H, 72H et 96H.
- La multiplicité de l'infection (MOI), plusieurs MOI 0,5, 2 et 5 sont évaluées . En effet, le rendement et la qualité des protéines peuvent également varier en fonction de la multiplicité de l'infection, et parfois un MOI plus faible peut produire des protéines de meilleure qualité et de limiter l'apparition des particules viables defectives.
- Localisation cellulaire de la protéine d'intérêt.
Western-Blot d'une extraction séquentielle des protéines en fonction de leur localisation intracellulaire de cellules SF9 infectées par le baculovirus recombinant exprimant une protéine d'intérêt.
Légende:
- La fraction du cytosol
- La fraction des membranes et des organelles
- La fraction nucléaire
- La fraction correspondant à la matrice cellulaire et au cytosquelette.
Les échantillons peuvent être analysés par Western-blots en utilisant des anticorps fournis par le client
A la fin du process, nous vous donnerons les données d'optimisation, ou le cas échéant, nous pourrons vous aiguiller sur la nécessité de modifier le promoteur, ou de vecteur ou de système.
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