Purifications de protéines élaboration de méthodes spécifiques de purifications de vos protéines.
Pour la purification de protéines en fusion avec des épitopes ou de formes "natives"
Services de purification de protéines recombinantes sur mesure.
Purification de protéines recombinantes par FPLC (Fast Protein Liquid Chromatography). Le plus courant et par défaut la protéine d'intérêt est fusionné avec un "tag" d'affinité (comme un queue 6 histidines) soit en N-terminal ou C-terminal afin de permettre une purification facile par affinité (IMAC) et d'obtenir en une étape des taux de pureté très élevée.
Cependant, pour différentes raisons, d'autres protocoles de purification peuvent être privilégiés, par exemple le besoin d'avoir une protéine dans sa configuration la plus native possible, le masquage du tag lors du repliement de la protéine, un clivage de la partie N-ter lors des processus de maturation, etc....
Altération de la conformation de la protéine. Cela peut être dû à la présence du tag d'affinité lui-même ou à une mauvaise expression ou repliement de la protéine recombinante. Le tag peut provoquer à une agrégation des protéines, ce qui rend la purification difficile.
* Les différentes techniques chromatographiques principalement utilisées en FPLC.
Cependant, Il y a plusieurs raisons pour lesquelles on pourrait choisir de purifier une protéine native plutôt qu'une protéine fusionnée avec un tag d'affinité :
Conservation de la structure et de l'activité :
En effet, les tags d'affinité utilisés pour la purification des protéines peuvent interférer avec la structure et la fonction de la protéine d'intérêt, ou induire des effets indésirables dans des applications ultérieures. En utilisant la protéine native, on évite ces effets potentiels.
Interférence avec les interactions avec d'autres molécules :
En effet, la présence d'un tag d'affinité peut influencer l'interaction d'une protéine avec d'autres molécules, comme des protéines partenaires ou des ligands et peut fausser les interactions biologiques étudiées.
Résoudre des problèmes de purifications des protéines fusionnées avec le tag d'affinité:
Perte du tag en effet lors du processus d'épissage, il est possible que le tag d'affinité en N-terminal soit perdu. Présence de nombreux produits de dégradation lors de la purifications lorsque le tag d'affinité est présent en C-terminal.
Les problèmes liés au tags d'affinité eux-même, peut rendre la purification ou la détection de la protéine plus difficile ou voire impossible. Dans certains cas, il peut être nécessaire de concevoir de nouvelles stratégies pour la prufication de la protéine d'intérêt.
Nous pouvons vous aider à concevoir des méthodes d'expression et de purification de protéines natives bien que cela peut présenter des défis techniques supplémentaires et exigent souvent des conditions de purification plus délicates.
Vous avez le besoin de garder une protéine active native ou vous expérimentez des problèmes de purification.
N'hésitez pas à nous faire part de vos besoins spécifiques.
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